乳糖和蔗糖的液相色譜檢測

乳糖和蔗糖的檢測

摘要：本實驗根據(jù)中國藥典2010版二部乳糖項下測試方法，采用液相色譜 （HPLC） 法結(jié)合示差折光檢測器分離乳糖與蔗糖，并選擇了4種不同類型的氨基柱對乳糖和蔗糖的保留及分離情況進行了考察。結(jié)果表明：流動相為乙腈:水=75:25（v/v），使用Innoval NH₂色譜柱（5 μm，100Å，4.6×250 mm） 對兩種物質(zhì)的分離度為2.44，實現(xiàn)了乳糖和蔗糖的良好分離，且各物質(zhì)峰形良好，保留時間穩(wěn)定，能夠滿足藥典要求。

關(guān)鍵詞：液相色譜法；示差檢測器；乳糖；蔗糖；氨基柱；

前言

乳糖是一種雙糖，由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖在β-1，4-位形成糖苷鍵相連，有兩種端基異構(gòu)體：α-乳糖和β-乳糖，在水溶液中可互相轉(zhuǎn)化。α-乳糖很容易結(jié)合一分子結(jié)晶水。乳糖甜度約是蔗糖的六分之一。蔗糖容易被酸水解，水解后產(chǎn)生等量的D-葡萄糖和D-果糖，其不具有還原性。發(fā)酵形成的焦糖可以用作醬油的增色劑。乳糖作為一種藥用輔料，以填充劑或稀釋劑的形式廣泛應(yīng)用于片劑、膠囊、顆粒劑和凍干產(chǎn)品中。然而，一般藥用乳糖來源于牛奶，可能存在可引起過敏反應(yīng)的雜蛋白。因此，2010版藥典增加了乳糖的檢查項內(nèi)容。本實驗以藥典為依據(jù)，實現(xiàn)了乳糖與蔗糖的良好分離。

1 實驗部分

1.1 儀器、試劑與材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

液相色譜儀，示差檢測器

1.1.2 試劑材料

超純水；乙腈（色譜純）；蔗糖和乳糖（客戶提供，分別加水溶解并稀釋成濃度為10 mg/mL的儲備溶液）

色譜柱1-6：規(guī)格均為5 μm，100Å，4.6×250 mm

1.1.3 色譜條件

流動相：A-水，B-乙腈，A:B=75:25 （v/v）；

流速：1.0 mL/min；

柱溫：室溫；

進樣量：10 uL；

2 結(jié)果與討論

本實驗對比了六種色譜柱對乳糖及蔗糖的分離效果，由表1及圖1-5可知，依據(jù)2010版藥典，流動相為乙腈:水=75:25（v/v），柱溫為室溫時，采用Innoval NH₂色譜柱分離效果，分離度為2.44。

表1. 不同氨基柱及HILIC色譜柱乳糖與蔗糖分離測試數(shù)據(jù)對比（乙腈：水=75：25）